Walz MULTI-COLOR-PAM-II, Fluorómetro de Clorofila de vários comprimentos de onda e ST-Kinetics

Destaques MULTI-COLOR-PAM-II:

Dois instrumentos numa caixa:
- Análise de flash não modulada
- Aplicações moduladas por PAM multicoloridos

A complete portfolio of fast measurements (time resolution down to 0.3 µs) to probe the PS II donor side and the presence of Car-triplets and Multi-Color (PAM) measurements to probe the PS II acceptor side, the electron transport chain and photosynthetic atividade.

Uma mistura de ambas as técnicas:
por exemplo aplicação de flashes de saturação de 3 µs, onde a cinética de decaimento do sinal de fluorescência induzido pode ser monitorizada através da medição de luz PAM com uma frequência de luz de medição decrescente logaritmicamente.


O novo MULTI-COLOR-PAM-II permite ao utilizador mais opções:

- O novo flashlamp STK (cinética de rotação única) e o detetor rápido acrescentam reações do lado doador PS II e trigémeos de automóveis ao já amplo portfólio.
- A troca rápida entre as medições PAM e ST-Kinetics proporciona sinergia, oferecendo uma mistura de ambas as técnicas.
- O instrumento é também suficientemente flexível para emular medições do tipo FRRF ou para produzir impulsos de saturação do tipo Ramp-Method.

- O instrumento foi pensado para medir suspensões, mas quem trabalha com folhas também não foi esquecido.
- O modelo anterior possuía um clip de folha que ainda pode ser utilizado no novo instrumento.
- Além disso, o flashlamp STK também possui um detetor e pode ser utilizado como uma aplicação independente para medições foliares.

Nota: o MULTI-COLOR-PAM-II já não contém uma unidade de bateria.

Exemplos de experiências dos três domínios de aplicação

O software divide as aplicações do MULTI-COLOR-PAM-II em 3 partes:

 Aplicações relacionadas com a atividade fotossintética, como curvas de indução (+ recuperação) e curvas de luz, mas também medições manuais.
 Experiências baseadas em scripts, como transientes O-I-1-I2-P/OJIP, cinética de reoxidação de QA- após um único flash de rotatividade, determinações Sigma(II).
 Experiências baseadas em flash, como oscilações do período 4, decaimento Car-tripleto e cinética de indução, P680+

As duas primeiras partes representam aplicações PAM e a última parte representa aplicações Single Turnover Kinetics (STK).

Configuração Single Turnover Kinetics (STK) para medições de folhas (ver abaixo)

Diferentes utilizadores podem ter necessidades diferentes, pelo que o MULTI-COLOR-PAM-II satisfaz isso oferecendo diferentes configurações.

Configurações possíveis:

 A configuração multicolor (PAM): o emissor multicolor (MCP-II-E) e o seu detetor (MCP-II-D1 ou MCP-II-D2ST)
 Configuração (suspensões) de deteção de dois comprimentos de onda (PAM): é adicionado um segundo detetor (MCP-II-D1 ou MCP-II-D2ST) para permitir a deteção de fluorescência, por ex. < 710 nm (maioritariamente PS II) e > 700 nm (PS II + PS I), em simultâneo. Um clipe de folha que permitirá a deteção de dois comprimentos de onda estará disponível num futuro próximo.
 Configuração completa: lâmpada de flash STK (intensidades máximas de flash > 1,0 mol fotões m-2 s-1) e detetor combinado (MCP-II-EDST + MCP-II-D2ST) permitindo a deteção de sinais até aprox. São adicionados 100 ns à configuração multicolorida (PAM). Isto dá acesso às reações colaterais dos dadores do PS II.
 Configuração Single Turnover Kinetics (STK) para medições de suspensão: lâmpada de flash STK (MCP-II-EDST) em combinação com o detetor combinado (MCP-II-D2ST).
 Configuração Single Turnover Kinetics (STK) para medições de folhas: A lâmpada flash STK como aplicação independente: a lâmpada flash STK contém um detetor para medições de fluorescência da superfície da amostra, o que a torna ideal para a medição de folhas.

Na configuração Multi-Color (PAM), o utilizador tem acesso a informação sobre o tamanho efetivo da antena PS II dependente do comprimento de onda: Sigma(II), reações do lado do aceitador PS II (QA – reoxidação) e fluxo de eletrões ao longo da cadeia de transporte de eletrões (transientes O-I1-I2-P/OJIP), mas também para análise de extinção de pulsos de saturação, curvas de indução e recuperação de luz escura, bem como curvas de resposta à luz, e tudo isto para 5 excitação diferente e medição de comprimentos de onda de luz ( 440, 480, 540, 590, 625 nm) mais luz branca que pode ser aplicada em qualquer combinação. Isto tem a vantagem de que alguém que trabalhe, por exemplo, com diatomáceas pode excitar estes organismos no verde e no caso das cianobactérias escolher 625 nm para excitar os ficobilissomas ou 440 nm para excitar as clorofilas da antena central.

Não só os diferentes comprimentos de onda para excitação e deteção de fluorescência fazem com que a configuração Multi-Color (PAM) se destaque. Outras características importantes são:

 A elevada sensibilidade do instrumento, que permite medições com amostras opticamente finas, ou seja, na ausência de gradientes de intensidade das várias qualidades de luz e evitando em grande parte a reabsorção de fluorescência dependente do comprimento de onda – livre de gradiente de luz.
 Livre escolha de comprimentos de onda de deteção utilizando filtros óticos, por exemplo, permitindo a deteção de fluorescência >700 nm, enriquecida em fluorescência PS I F(I), e < 710 nm, enriquecida em fluorescência PS II F(II), que pode ser medida simultaneamente em condições iguais.
 Caracterização do mesmo estado de uma determinada amostra por medições comparativas de PAM e cinética de flash (STK).
 A liberdade quase total para criar ficheiros de gatilho e de script significa que as experiências que podem ser concebidas são limitadas principalmente pela criatividade do utilizador.

Novas características do MULTI-COLOR-PAM-II:
Os novos elementos do MULTI-COLOR-PAM-II acrescentam domínios totalmente novos ao portfólio de medição do instrumento, tornando-o ainda mais um fluorómetro multifuncional.

 Alta resolução temporal: Os novos detetores STK fornecem uma resolução temporal de 0,3 µs.
 Respostas de flash resolvidas no tempo: o MULTI-COLOR-PAM-II é o primeiro instrumento comercialmente disponível com o qual o rendimento de fluorescência durante um flash de saturação µs pode ser medido e a extinção tripla de carotenóides (TQ) e a extinção dependente do lado do dador (DQ) podem ser diferenciados.
 Altamente preciso: Para uma análise detalhada das respostas do flash, o seu tempo é muito preciso e reproduzível, e a forma dos flashes aproxima-se de um retângulo, com os LEDs a necessitarem de cerca de 0,5 µs para atingir a intensidade total. É fornecida uma rotina especial para a correcção do perfil flash.
 Flashes extremamente intensos: Intensidades de flash de mais de 1.000.000 µmol de fotões de 440 nm m-2 s-1 podem ser alcançadas com a unidade emissor-detector EDST (produzindo mais de 1 excitação por µs).
 Sonda-bomba: Experiências de flash duplo com intervalos escuros variáveis ​​​​∆t (de 1 µs a 10 ms) permitindo medições de relaxação altamente flexíveis de várias formas de extinção.
 Oscilações do período 4: Podem ser utilizadas frequências de flash até 100 Hz (intervalo de tempo de 10 ms) para trens de flash para sondar os estados S do complexo em evolução de oxigénio.
 Medições de folhas: Embora o instrumento tenha sido originalmente concebido para medições de suspensão, a unidade detetor-emissor EDST (lâmpada de flash STK) também pode ser utilizada isoladamente para medir folhas. Além disso, em breve estará disponível uma configuração na qual dois emissores são colocados sob um ângulo de 45° em relação ao emissor multicolorido, o que permite a deteção de dois comprimentos de onda da fluorescência emitida pelas folhas.
 STK incorporado na gravação PAM: Graças à comutação rápida [tempo de comutação de 8-10 µs] entre medições rápidas não moduladas e PAM, um ST pode ser colocado em qualquer lugar ao longo de um tradicional - por ex. Registo O-I1-I2-P ou Slow Kinetics, com o STK resultante a revelar detalhes sobre o estado do PS II no momento do flash. Tudo isto em conjunto faz do MULTI-COLOR-PAM-II um fluorómetro muito completo, permitindo ao utilizador sondar e monitorizar o PS II e a cadeia de transporte de eletrões fotossintética de muitas formas diferentes.